乳铁蛋白ELISA检测

一、乳铁蛋白ELISA检测的说明：  

（1）乳铁蛋白(LF)是80KDa的糖蛋白，属于运铁家族中的一员，可以结合和转运铁离子(Fe3+)。  

（2）乳铁蛋白检测存在于生物体液中，是哺乳动物先天免疫系统中的重要成分。它的保护作用包括直接降低多种生物的生物活性如绝大多数的微生物如细菌、病毒、真菌、寄生虫，并且有消炎和抗癌作用。  

（3）这些功能作用机制是它不仅可以结合铁离子同时糖蛋白会与宿主和病原体的分子和细胞相互作用。  

（4）它存在于黏膜分泌物中，如尿和血浆中，尤其在牛奶和牛初乳中含量很高。它在牛奶中的含量从0.05g/l牛初乳至0.5g/l牛奶不等。  

（5）自2012年欧洲食品安全局批准乳铁蛋白作为新型的成分添加至婴配粉中后，乳铁蛋白的需求量剧增，尤其是中国。  

（6）为了检测添加的牛乳铁蛋白的含量，EuroProxima公司研发了乳铁蛋白快速试剂盒，该试剂盒适合检测婴配粉中乳铁蛋白含量。  

二、乳铁蛋白ELISA检测的原理：
（1）ELISA试剂盒有12条板孔，每条8孔，预包被了抗体。辣根过氧化酶标记的乳铁蛋白(-HRP)和标准品或样品被加入到板孔中。  

（2）存在于标准品溶液或样品游离的乳铁蛋白和乳铁蛋白-HRP酶连接物竞争结合乳铁蛋白抗体结合位点(竞争性酶联免疫)。孵育30分钟后，未结合的试剂被洗涤除去。  

（3）结合的乳铁蛋白-HRP酶连接的量通过加入底物/发色剂(H2O2/四甲基联苯胺.TMB)显现出来，连接的酶连接物将无色的色原物质转化为有色。加入硫酸终止发色反应，在450nm下测定吸光度。样品中乳铁蛋白的含量与吸光度值成反比。