氯霉素检测试剂采用间接竞争ELISA方法检测水产组织、畜禽组织、肝脏、蛋类、蜂蜜、牛奶及饲料等样本中的氯霉素药物(Chloramphenicol,CAP),试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。
检测时,加入标准品或样本溶液,样本中的氯霉素药物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗氯霉素药物抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光度值与其所含氯霉素药物含量成负相关,与标准曲线比较即可得出样本中氯霉素药物的残留量。
下面让我们一起来了解一下氯霉素检测的试剂步骤吧
将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上,洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
实验开始前,用去离子水将20×浓缩洗涤液按20倍稀释成工作洗涤液。
1、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
2、加样反应:加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中,然后加抗体工作液50µl/孔,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光反应30分钟。
3、洗涤:将孔内液体甩干,用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次,每次间隔30秒,最后用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。
4、加酶反应:加酶标记物100µl/孔,25℃避光反应30分钟。
5、洗涤:同上
6、显色:加底物液A50µl/孔,再加底物液B50µl/孔,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光显色15分钟。
7、终止:每孔加入终止液50µl,轻轻振荡混匀,终止反应。
8、测吸光值:用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成。