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    分享一下关于氯霉素检测试剂具体实行方法

    发布时间: 2022-02-24  点击次数: 363次
      今天为大家分享一下关于氯霉素检测试剂具体实行方法,话不多说下面让我们一起来了解一下吧。
     
      一、样品制备
     
      a) 将3克已均质的样品放入15mL离心管中,再加入6mL乙酸乙酯,震荡5分钟。
     
      b) 用离心机离心1700×g10分钟,取2mL上层液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中,于50℃下,利用氮气将有机溶剂吹干。
     
      c) 在此玻璃管中加入正己烷1mL,先将残余物完全溶解后,再加入1mL样品稀释液,震荡30秒钟。
     
      d) 用离心机离心1700×g 10分钟,利用吸管吸去包含中问乳化层部分的上层液(正己烷),再吸取下层液(水层)备用。
     
      稀释倍数:1
     
      若待测物为白虾可按以下流程将样品做8倍浓缩以增加检品敏感度
     
      a) 将6克已均质的样品放入15mL离心管中,再加入6mL乙酸乙酯,震荡5分钟。
     
      b) 用离心机离心1700×g 10分钟,取4mL上层液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中,于50℃下,利用氮气将有机溶剂吹干。
     
      c) 在此玻璃管中加入正己烷2mL,先将残余物完全溶解后,再加入0.5mL样品稀释液,震荡30秒钟。
     
      d) 用离心机离心1700×g 10分钟,利用吸管吸去包含中问乳化层部分的上层液(正己烷),再吸取下层液(水层)备用。
     
      稀释倍数:0.125
     
      二、操作步骤
     
      1、于适当微孔中分别加入100mL标准溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。
     
      2、在另外的微孔中加入100mL 已完成前处理的样品溶液。
     
      3、再于每一微孔中另再加入50mL酶标记物。
     
      4、轻敲盘子四周,使其充分混合后于室温下避光静置温育1小时。
     
      5、将微孔中的反应液甩掉,再将洗液加满每一微孔后甩掉,重复洗3次。
     
      6、最后一次甩掉后,在吸水纸上拍干。
     
      7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后,轻敲盘子四周,使其充分混合。
     
      8、于室温下避光静置温育20分钟。
     
      9、于每一微孔中加入100mL反应终止液。
     
      10、用酶标仪于波长450nm下判读。
     
      三、判定结果
     
      1. 计算B/B0值。用样品或标准液吸光度值(B)除以零标准吸光度值(B0)再乘以100%。
     
      2. 以B/B0值为纵坐标,以标样浓度的对数值为横坐标,做标准半对数曲线。
     
      3. 根据每个样品的B/B0值就可从曲线上读出相对应样品的浓度。
     
      4. 由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。
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